酶抑制作用特指通过特异性结合导致催化活性下降的生物化学过程，与高温或强酸引起的蛋白质变性存在本质差异[1] 。分类体系依据抑制剂结合特性分为：
不可逆抑制通过共价键结合活性中心必需基团，造成酶永久失活。包含非专一性抑制剂（如有机磷化合物结合丝氨酸羟基）和专一性抑制剂两类[1]。典型实例包括敌敌畏抑制胆碱酯酶、重金属离子使酶失活等。
可逆抑制通过非共价键与酶可逆性结合，形成动态平衡系统。根据作用位点差异细分为：
竞争性抑制：抑制剂与底物竞争结合活性中心（如丙二酸抑制琥珀酸脱氢酶）
非竞争性抑制：抑制剂结合活性中心外区域（如EDTA螯合金属辅助因子）
反竞争性抑制：仅与酶-底物复合物结合[1]
有机磷化合物通过磷酰化反应共价修饰丝氨酸羟基，不可逆抑制乙酰胆碱酯酶活性。青霉素类抗生素则作用于细菌转肽酶，阻断细胞壁肽聚糖交联过程[1] 。
在可逆抑制中，竞争性抑制可通过增加底物浓度解除，其动力学特征表现为Km值增大而Vmax不变。例如磺胺类药物结构与对氨基苯甲酸相似，竞争性抑制二氢叶酸合成酶，干扰细菌叶酸合成[1] 。
HIV蛋白酶抑制剂通过精确模仿病毒蛋白切割位点结构，竞争性结合蛋白酶活性中心，阻止HIV病毒颗粒成熟。这类药物开发体现了抑制作用在抗病毒治疗中的精准应用[1] 。
几丁质合成酶抑制剂通过干扰昆虫表皮形成必需的几丁质合成，被广泛应用于低毒性农药研发。相比传统神经毒性农药，该作用机制对非靶标生物危害显著降低[1] 。
通过改良米氏方程$V = \frac{V_{max}[S]}{K'_m + [S]}$可量化描述抑制效应，其中表观Km（$K'_m$）与Vmax的变化模式具有类型特异性：
竞争性抑制：$K'_m = K_m(1 + [I]/K_i)$，Vmax不变
非竞争性抑制：$V'{max} = V{max}/(1 + [I]/K_i)$，Km不变
反竞争性抑制：$K'_m = K_m/(1 + [I]/Ki)$，$V'{max} = V_{max}/(1 + [I]/K_i)$[1]
通过双倒数作图法（1/V对1/[S]作图）可直观区分抑制类型：竞争性抑制直线在纵轴截距相同斜率不同；非竞争性抑制直线斜率相同纵截距不同；反竞争性抑制产生一组平行直线[1] 。