fura-2

分子式见图.

它能特异性地与Ca2+结合,结合比例为1:1同时Fura-2可发出荧光,结合Ca2+后的最大激发波长从结合前的380nm移向340nm,其发射荧光强度与结合Ca2+的浓度有定量关系。由于Fura-2是极性大的酸性化合物,无法进入细胞内,为此在其负性基团上结合了乙酰氧甲酯,使其成为Fura-2/AM.既增加了酯溶性又消除了负电荷,使之容易进入细胞内,在细胞内,Fura-2/AM被酯酶水解成Fura-2后可与胞浆游离Ca2+可逆性结合.但Fura-2/AM在细胞外并不能与Ca2+结合,所以检测的340nm激发下的发射荧光强度可定量的确定[Ca2+]i及其动态变化。

(a) 荧光强度大,敏感度高,且所用剂量小,对细胞内环境影响小;

(b) Fura-2与Ca结合后的激发光谱高峰有较大的漂移(从380nm移至340nm),且Fura-2测定[Ca2+]i基本不受细胞密度及荧光剂浓度的影响,能校正胞浆的Ca2+浓度,易于识别与计算;

(c) 对钙,镁的选择性高;

(d) 自身荧光小;

(e) Fura-2与Ca结合的解离常数(Kd) 37℃为224,其标准曲线具有良好的线性,其对Ca2+的测定范围为10-5~10-82+mol.L-1,且能测定短暂而快速的Ca浓度的变化。

它主要应用于两个方面,一是将Fura-2直接注入单个细胞内,用荧光显微镜测定其Ca2+浓度,该方法准确可靠,还可观察到细胞内不同部位Ca2+浓度的变化,但需要昂贵的仪器设备;二是测定细胞悬液、组织块或贴壁细胞的细胞内Ca2+。

Fura 2对Quin 2的荧光特性做了改进。1 μM Fura 2结合后的信号强度相当于30 μM的Quin 2结合后的信号强度。这样就保证在实验中可以使用比Quin 2的浓度低得多的Fura 2指示剂。Fura 2是一种使用最广泛的比率测量的钙荧光指示剂。目前适用于Fura 2实验的设备有很多,它特别适合于用数字成像显微镜来检测。它比Indo 1更不易受到光褪色作用的影响。细胞形状的改变有时候会影响340 nm和380 nm的荧光比率,比如,平滑肌收缩会同时引起这些波长的荧光信号强度的减小。另外,对于血管来说,340 nm的信号强度的增加会因为血管收缩而趋向于变小,而380 nm信号强度的减小会因为血管收缩而变大。Fura 2-AM是Fura 2的一种乙酰甲酯衍生物,通过培养,能够轻易地负载到细胞中。

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