上皮组织分为被覆上皮、腺上皮、感觉上皮、生殖上皮、肌上皮等,而通常所说的上皮就是指被覆上皮。 肾上皮细胞管型
上皮细胞按细胞层数可分为单层和复层两类,按形状可分为柱状和鳞状。
柱状上皮细胞:主要分布于鼻腔、鼻咽、器官、肺、胃、肠、子宫颈、子宫内膜及输卵管等部位。
鳞状上皮细胞:被覆于全身皮肤、口腔、喉部、鼻咽的一部分、食道、阴道的全部以及子宫颈。鳞状上皮细胞分为基底层细胞、中层细胞和表层细胞。
皮肤外层的上皮细胞普遍角质化,有保护和吸收的作用。
腔道中的上皮细胞多分化,有分泌,排泻和吸收等功能。
消化器官和肺等器官表面的上皮细胞,对于消化吸收、交换氧等发挥着重要作用[1] 。
1)表皮细胞培养
1.取材:取外科植皮或手术残余皮肤小块,以角化层薄者为佳,早产流产儿皮肤更好,切成0.5~1平方厘米小块。
2.EDTA处理:先置入0.02%EDTA中室温置5分钟。
3.冷消化:换入0.25%胰蛋白酶中,置4℃过夜。
4.分离:取出皮肤,用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。
5.温消化:取出表皮单独处理,用剪刀剪成更小的块后,置入新的0.25%胰蛋白酶中,37℃再消化30~60分钟。
6.用吸管轻轻反复吹打,使成细胞悬液。
7.培养液:通过80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸上清,直接加入Eagle液和20%小牛血清,制成细胞悬液,接种入碟皿中,CO2温箱培养。
2)乳腺组织培养
直接培养法:(适于培养含纤维少的软组织)
1.在含有少量培养液或Hanks液的容器中,用锋利刀片将组织反复切割成碎块。
2.把组织碎块连同液体注入离心管中,再补加少许培养液,用吸管吹打片刻,置试管架3~5分钟。吸除上层液可排除非乳腺细胞部分。重复2~3次。
3.末次处理结束后,向沉降管中再补加培养液,用吸管稍吹打,使沉降物重悬。不待细胞团块下降立即通过3~4层无菌纱布滤入另管中。
4.调整好适宜密度,接种入培养瓶中培养。
胶原酶消化法:(适于处理含纤维多的较硬组织)
其过程与培养其它组织相同。
3)胃上皮细胞培养
1.取材:取胃溃疡或胃癌手术切除胃标本远端非病变区粘膜少许。
2.清洗:用含庆大霉素(400微克/毫升)和二性霉素(2微克/毫升的Hanks)液漂洗后,用钝器剥离下粘膜,剪成1mm3大小。
3.消化:在I型胶原酶和透明质酸酶中,于37℃中消化80分钟。